تبلیغات
پرورش قارچ | آموزش تولید قارچ صدفی ، دکمه ای ، طلایی - آموزش جامع تولید و کشت آگار (بخش دوم)

این آموزش توسط بسیاری از افراد موفق در زمینه پرورش قارچ استفاده شده

این مجموعه برای شروع یک کسب وکار پرسود بسیار موفق بوده است

بهترین مجموعه برای کسب و کار زود بازده از ابتدا تا انتهای پرورش قارچ و کسانی که به فکر کسب درآمد و موفقیت در این کار پرسود هستند100 درصد توصیه میشود.

خرید آموزش پرورش قارچ

توجه کنید: این محصول دارای گارانتی بدون قید و شرط فروشگاه با ضمانت بازگشت پول و یا تعویض میباشدپس با اطمینان خرید کنید

این محصول به صورت اورجینال از فروشگاه ارائه میشود و شماره مجوز در توضیحات درج گردیده

خرید پستی

در ۳ DVD فقط 16500 تومان! شماره مجوز: ۱۱-۳۴۵۷۶۲۳

با خرید این مجموعه استثنایی به صورت اصولی و بدون شکست کار خود را انجام دهید

آموزش جامع تولید و کشت آگار (بخش دوم)

کشت هاگ[xv][xv]

کشت خالص به منظور تهیه اسپان مورد نیاز برای تکثیر قارچ خوراکی را به دو روش می‌توان تهیه نمود. کشت هاگ، که به نوعی می‌توان آن را تکثیر جنسی نامید و دارای تفریق صفات و تنوع بالای نتاج حاصله از نظر کیفیت و کمیت محصول می‌باشد. از این روش بیشتر برای تهیه بذر قارچاستفاده می‌شود. روش دوم کشت بافت زنده[xvi][xvi] یا به اصطلاح تکثیر غیرجنسی[xvii][xvii] و یا کلونینگ[xviii][xviii] می‌باشد. این روش به علت شباهت بالای نتاج تولیدی با والدین؛ بیشتر در تکثیر قارچ‌هائی که از نظر کیفیت و کمیت محصول در حد مطلوبی هستند استفاده می‌شود.

پرورش دهندگان قارچ، کشت هاگ را بدلیل راحتی اجرا و ماندگاری بالای هاگ‌ها حتی تا ماهها بعد از تجزیه کلاهکها ترجیح می‌دهند. اما ماندگاری کلاهکها یا بافت زنده بسیار کم است (1 تا 2 روز) و باید بلافاصله بعد از چیدن بافت، اقدام به کشت نمود.

گرفتن نقش هاگ[xix][xix]

مرحله اول در کشت هاگ؛ جمع‌آوری مقداری هاگ (نقش اسپور) از قارچ‌های سالم و مناسب می‌باشد. بدین منظور کلاهک سالم، تازه و کاملاً تمیزی را از ساقه جدا نموده و بطور واژگون روی یک کاغذ سفید یا سطح شیشه‌ای تمیز (اسلاید میکروسکوپ) یک تا دو ساعت می‌گذاریم. چنان‌چه کلاهک موردنظر خشک باشد، جهت رهاسازی آسانتر هاگ یکی دو قطره آب مقطر به آن زده و برای جلوگیری از کاهش تبخیر و جریان هوای مستقیم، یک بشر بر روی آن می‌گذاریم. پس از چند ساعت که هاگ‌ها، کاملاً رها شد و نقش تیغه‌ها روی کاغذ افتاد؛ کاغذ هاگ‌ها را بریده از وسط تا می‌زنیم و دریک ظرف کاملاً در بسته گذاشته وروی آن را بر چسبی حاوی زمان جمع‌آوری؛ گونه قارچ و شماره جمع‌آوری می‌زنیم. در صورت جمع‌آوری هاگ‌ها روی لامل میکروسکوپ، کافیست هاگ‌ها را ما بین دو لامل قرار داده دور تا دور لبه این دو لامل را با نوار چسب بچسبانیم تا از نفوذ هاگ‌های آلاینده، ایمن شود. در صورتی که در جمع‌آوری و نگهداری هاگ‌ها دقت کافی نشود، محیط کشت هاگ آلوده شده و امکان به دست آوردن یک کشت خالص کاهش می‌یابد.

به ادامه مطالب بروید

 

 



Bunsen burner .[1][i]

inoculating .[1][ii]

glove box .[1][iii]

P.D.A= Potato Dextrose agar .[1][iv]

MEA= Malt Extract Agar .[1][v]

yeast .[1][vi]

(نوعی ماده آلیومینی سهل الهضم)  Peptone  .[1][vii]

Neopeptone .[1][viii]

ویتامین ب کمپلکس  Thiamine  .[1][ix]

مخفف  Potato Dextrose Yeast .[1][x]

مخفف  Malt Peptone Grain .[1][xi]

1. توجه شود که از مالتهای تیره رنگ آبجو سازی استفاده نکنید، بلکه باید از مالتهای روشن و عسلی و پودر مانند استفاده نمایید.

Pressure cooker .[1][xiii]

. معادل با.kg/cm2. 05/1..یا تقریباً.1 آتمسفر( atm)

Spore culture .[1][xv]

Tissue culture .[1][xvi]

Asexual propagation . [1][xvii]

clonning .[1][xviii]

Spore print .

چنانچه در حین تهیه محیط کشت، pH خیلی پائین یا بالا رود، می‌توان بترتیب آن را با Naoh یا Hcl (1 تا 1/0 مولار) رقیق، تعدیل کرده سپس محیط کشت را کاملاً هم زده و سپس pH آن را با یک pH سنج یا کاغذ تورنسل معمولی می‌سنجیم ( pH یک مول Hcl ، صفر؛ یک مول Naoh =12 و یک مول آب مقطر= 7 است).

2.ضدعفونی محیط کشت: این کار معمولاً به دو روش صورت می‌گیرد.

الف: با مواد شیمیائی: مانند الکل 70درصد؛ هیپوکلریت سدیم (وایتکس) 1درصد و بالاخص آنتی‌بیوتیکها. در هر صورت ساده‌ترین راه، استفاده از مواد گیاهی غیر آلوده است. جهت کنترل باکتریها در محیط کشت، 1/0 گرم از محلول سولفات جنتامایسین 80-60درصد را قبل از عمل اتوکلاو کردن باید به هر لیتر از این محیط‌ها اضافه نمود. همچنین می‌توان از نوع دیگر آنتی‌بیوتیک بنام استرپتومایسین بعد از استریل کردن محیط کشت استفاده کرد. در مجموع باید از آنتی‌بیوتیکها بصورت موقتی و به مقدار بسیار اندک بهره جست چون غلظت بالای آنها، مانع رشد و نمو بعضی گونه‌ها و از طرف دیگر ایجاد مقاومت در باکتریها می‌شود.

ب) با بخار: بعد از اختلاط کامل ترکیبات محیط کشت و در صورت باقی ماندن اثرات باکتری بعد از ضدعفونیِ شیمیائی (آنتی‌بیوتیکها) می‌توان برای رفع هر گونه آلودگی با بخار تحت فشار، محیط کشت را استریل و یا به اصطلاح اتوکلاو نمود. استریل کردن صحیح، بستگی به زمان، فشار، درجه حرارت و حجم ماده مورد استریل دارد. در شرایط عادی می‌توان محیط کشت آماده را داخل ارلن پیرکس (به علت دهانه تنگ آن میزان تهویه، خشک شدن و ضریب آلودگی کاهش می‌یابد) ریخته درب آن را با یک فویل آلومینیومی پوشاند. دقت کنید که حجم آگار درون ارلن نباید از  تا  حجم کل ظرف بیشتر شود.

ظرف کشت را داخل اتوکلاو یا زودپز معمولی[xiii][xiii] قرار داده و ته زود‌پز را یک سانتی‌متر آب مقطر بریزید تا بخار لازم تأمین شود. طبق دستورالعمل شرکت سازنده، درب زودپز را کاملاً بسته آن را حرارت دهید تا بخار فراوان تولید نماید. قبل از بستن سوپاپ اطمینان بخار، بگذارید تا بخار آن به مدت 4 تا 5 دقیقه خارج شود. به آرامی فشار را به 15 پوند[xiv][xiv] رسانده و 30 دقیقه در همین فشار نگهدارید. توجه کنید دمای ظرف از 121 درجه سانتی گراد فراتر نرود، چه در غیر این صورت قند موجود در محیط کشت، سوخته و به اصطلاح کارامل می‌شود که در نتیجه آن؛ رشد میسلیوم متوقف شده، یکسری جهش‌های ناخواسته ژنتیکی پدیدار می‌شود. از طرفی اتوکلاو کردن بیش از 30 دقیقه باعث ته‌نشین شدن املاح مفید (بخصوص k+ ) و تجزیه آگار می‌شود. هم چنین باید ظروف خالی شیشه‌ای و کاغذها را بطور جداگانه به مدت 30 دقیقه در دمای 130 سانتی‌گراد (بصورت خشک) استریل نمود.

نکته حائز اهمیت دیگر در مورد اتوکلاو کردن، این که زمان لازم برای این عمل بسته به ارتفاع از سطح دریا، متفاوت است. طبق قانون بویل ـ ماریوت؛ در حجم ثابت، دما و فشار رابطه مستقیمی با یکدیگر دارند. فشار هوا را معمولاً نسبت به سطح استاندارد دریا محاسبه ‌نموده و هر چه از سطح دریا بالاتر می‌رویم فشار هوا کمتر می‌شود. لذا در ارتفاعات بالاتر، متناسب با مقدار ارتفاع از سطح دریا، باید فشار اتوکلاو یا زودپز را افزایش دهیم تا خللی در عمل استریلیزاسیون وارد نشود. ذیلاً نسبت‌های بین پارامترهای دما، فشار هوا، و تغییرات نقطه جوش آب در ارتفاعات مختلف را در جدول ذیل می‌بینید. بعنوان مثال در ارتفاع حدوداً 1500 متری از سطح دریا، نقطه جوش آب نسبت به سطح دریا تقریباً 5/4 -5 درجه سانتی‌گراد کاهش می‌یابد (C˚95) و از طرفی در این ارتفاع؛ فشار هوا 5 پوند یا تقریباً 4/0 اتمسفر نسبت به سطح دریا افزایش می‌یابد (4/1 اتمسفر) در نتیجه با توجه با این که نباید دمای داخل اتوکلاو را (به سبب بروز تغییرات شیمیائی مواد داخل آن) افزایش دهیم، بناچار مجبوریم، فشار را به میزان 4/0 آتمسفر (5 پوند) بالا ببریم تا جبران 5 اختلاف دما را در این ارتفاع با توجه به حجم ثابت مواد درون اتوکلاو بنماید.

 

 

رابطه ارتفاع و نقطه جوش

رابطه فشار- دما در حجم ثابت

نقطه جوش

ارتفاع ازسطح دریا(متر)

فشارKg/cm2

(سانتی گراد) دما

100

در سطح دریا

07/0

100

99

307

2/0

104

98

619

3/0

108

97

5/934

7/0

115

96

1250

=1atm05/1

121

95

1567

5/1

126

93

1892

75/1

130

 

توجه کنید استریلیزاسیون در فشار 05/1 kg/cm2 به مدت یک ساعت دارای نتایج مشابهی با استریلیزاسیون در فشار kg/cm22 به مدت 30 دقیقه (یعنی دوبرابر کردن فشار و نصف کردن مدت زمان) دارد؛ منتها مسأله مهم در این جا این است که اکثر زودپزها تحمل این فشار را ندارند که باید حتماً قبل از استفاده به برچسب کنترل کیفی روی هر زودپز توجه شود.

بعد از اتمام استریل کردن؛ زودپز را در آزمایشگاه یا یک اطاق نیمه استریل قرار داده، اجازه دهید تا قبل از باز کردن درب آن، فشار به یک پوند (07/0kg/cm2) کاهش یابد. سپس درب آن را باز نمائید و اقدام به ریختن آگار در پتری دیش‌ها نمائید. باید دانست با هر لیتر از محلول آگار بدست آمده می‌توان 30 پتری دیش 15×100 میلی‌متر را پر نمود. چنانچه با محدودیت فضای میزکار مواجه هستید، می‌توانید پتری دیش‌ها را پس از پر نمودن یک به یک روی هم بگذارید اما در‌ غیر این صورت می‌توانید هر یک از پتری دیش‌ها را در کنار هم قرار دهید و دامنه کار خود را توسعه دهید .

 

پیش از پر نمودن پتری دیش‌ها، محلول کشت را به شدت تکان دهید تا محتویات آن خوب پخش شده مخلوطی همگن بدست آید. سپس بگذارید تا آگار خنک شده و یکنواخت گردد و سپس اقدام به پر نمودن پتری دیش‌ها نمائید تا بدین وسیله از تعریق جدار داخلی ظروف که از ریختن محلول آگار گرم ناشی می‌شود، جلوگیری شود.

حال، این محلول آماده کشت هاگ یا بافت زنده می‌باشد که در ادامه روش آنرا خواهیم دید.

کشت هاگ[xv][xv]

کشت خالص به منظور تهیه اسپان مورد نیاز برای تکثیر قارچ خوراکی را به دو روش می‌توان تهیه نمود. کشت هاگ، که به نوعی می‌توان آن را تکثیر جنسی نامید و دارای تفریق صفات و تنوع بالای نتاج حاصله از نظر کیفیت و کمیت محصول می‌باشد. از این روش بیشتر برای تهیه بذر قارچاستفاده می‌شود. روش دوم کشت بافت زنده[xvi][xvi] یا به اصطلاح تکثیر غیرجنسی[xvii][xvii] و یا کلونینگ[xviii][xviii] می‌باشد. این روش به علت شباهت بالای نتاج تولیدی با والدین؛ بیشتر در تکثیر قارچ‌هائی که از نظر کیفیت و کمیت محصول در حد مطلوبی هستند استفاده می‌شود.

پرورش دهندگان قارچ، کشت هاگ را بدلیل راحتی اجرا و ماندگاری بالای هاگ‌ها حتی تا ماهها بعد از تجزیه کلاهکها ترجیح می‌دهند. اما ماندگاری کلاهکها یا بافت زنده بسیار کم است (1 تا 2 روز) و باید بلافاصله بعد از چیدن بافت، اقدام به کشت نمود.

گرفتن نقش هاگ[xix][xix]

مرحله اول در کشت هاگ؛ جمع‌آوری مقداری هاگ (نقش اسپور) از قارچ‌های سالم و مناسب می‌باشد. بدین منظور کلاهک سالم، تازه و کاملاً تمیزی را از ساقه جدا نموده و بطور واژگون روی یک کاغذ سفید یا سطح شیشه‌ای تمیز (اسلاید میکروسکوپ) یک تا دو ساعت می‌گذاریم. چنان‌چه کلاهک موردنظر خشک باشد، جهت رهاسازی آسانتر هاگ یکی دو قطره آب مقطر به آن زده و برای جلوگیری از کاهش تبخیر و جریان هوای مستقیم، یک بشر بر روی آن می‌گذاریم. پس از چند ساعت که هاگ‌ها، کاملاً رها شد و نقش تیغه‌ها روی کاغذ افتاد؛ کاغذ هاگ‌ها را بریده از وسط تا می‌زنیم و دریک ظرف کاملاً در بسته گذاشته وروی آن را بر چسبی حاوی زمان جمع‌آوری؛ گونه قارچ و شماره جمع‌آوری می‌زنیم. در صورت جمع‌آوری هاگ‌ها روی لامل میکروسکوپ، کافیست هاگ‌ها را ما بین دو لامل قرار داده دور تا دور لبه این دو لامل را با نوار چسب بچسبانیم تا از نفوذ هاگ‌های آلاینده، ایمن شود. در صورتی که در جمع‌آوری و نگهداری هاگ‌ها دقت کافی نشود، محیط کشت هاگ آلوده شده و امکان به دست آوردن یک کشت خالص کاهش می‌یابد.

 





طبقه بندی: آموزش کشت آگار،